آزمون تب زایی در خرگوش (Pyrogen test)

آزمون تب زایی یا بررسی پیروژن بودن محصولات دارویی، نوترکیب و تجهیزات پزشکی در آزمایشگاه همکار نیکوفارمد آریا مطابق استاندراد فارماکپه آمریکا (USP) و همچنین British Pharmacopeia انجام می‌گیرد.

برای کسب اطلاعات بیشتر و دریافت خدمات با ما تماس بگیرید.

یکی از مهمترین عوامل ایجاد کننده تب در موجودات، لیپو پلی ساکاریدهای (LPS) آزاد شده از دیواره باکتری‌های گرم منفی است که با تحریک سیستم ایمنی در بدن موجودات سبب افزایش دمای بدن یا تب در آنها می‌گردد.
تشخیص عوامل تب‌زا به دلیل اهمیت بالای آن در ایجاد شوک آنافیلاکتیک بسیار اهمیت دارد. به منظور تشخیص تب زایی، محصولات تولید شده زشکی، دارویی و نوترکیب بر روی خرگوش مورد آزمون قرار میگیرند تا تب زا بودن آنها مورد بررسی قرار گیرد. در این آزمون مشخص می‌گردد که آیا ماده مورد نظر در بدن به عنوان پیروژن شناخته میشود و یا خیر.

تشخیص عوامل تب‌زا به دو شیوه درون تنی (In vivo) و برون تنی (In vitro) قابل انجام است. در شیوه درون‌تنی، ماده مورد آزمون به خرگوش تزریق شده و واکنش تب زایی در آنها بررسی می گردد.در شیوه برون تنی، تب زا بودن محصولات توسط آزمون LAL مورد بررسی قرار میگیرد.

آزمون تب زایی یا بررسی پیروژن بودن محصولات دارویی، نوترکیب و تجهیزات پزشکی به صورت درون تنی و برون تنی در آزمایشگاه همکار نیکوفارمد آریا مطابق استاندراد فارماکپه آمریکا (USP) و همچنین British Pharmacopeia انجام می‌گیرد.

آزمون تب زایی، LAL (اندوتوکسین باکتریایی )

اندوتوکسین ها که نوعی پیروژن هستند، لیپوپلی ساکاریدهای موجود در دیواره سلولی باکتری های گرم منفی هستند. پیروژن ها به عنوان یک کلاس، مواد تب زا هستند که اگر بیش از غلظت های معین برای انسان تجویز شوند، می توانند مضر یا حتی کشنده باشند. برای این آزمون سه روش وجود دارد: روش تشکیل لخته ژل که براساس تشکیل ژل می باشد و در ادامه این مقاله به شرح آن می پردازیم. روش کدورت سنجی که براساس تشکیل کدورت بعد از شکاف در یک سوبسترای داخلی می باشد. دراین روش، براساس کدورت سنجی از یک ابزار فتومتریک برای خواندن کدورت محلول تست لخته شده استفاده می شود. این نوع آزمون نسبت به روش لخته ژل (LoD از 0.001 EU/ml) حساس تر است و نتایج قابل اندازه گیری را ارائه می دهد. روش رنگ سنجی که براساس ایجاد رنگ بعد از شکاف در یک کمپلکس سنتتیک پپتید-کروموژن است. در این روش، از یک لوله یا میکروپلیت خوان برای اندازه گیری درجه تغییر رنگی که در طول فرآیند لخته شدن ایجاد می شود، استفاده می گردد. این روش حساس‌ترین (LoD 0.0002 EU/ml) اما گران‌ترین نوع آزمون سنجش اندوتوکسین است. با استفاده از هر یک از این روش­ها می­توان آزمون اندوتوکسین را انجام داد، اما در صورت شک در نتیجه، تصمیم نهایی براساس آزمون تشکیل ژل انجام می­گیرد مگر اینکه در توضیحات مربوط به محصول روش آزمون اندوتوکسین مشخص شده باشد. 

 

آزمایش LAL (لیمولوس آمبوسیت لیزات) Limulus Amebocyte Lysate))که به عنوان آزمایش اندوتوکسین باکتریایی (Bacterial Endotoxin test, BET) نیز شناخته می شود،  آزمونی برای تشخیص یا تعیین اندوتوکسین باکتریهای گرم منفی در داروها و نیز محصولات بیولوژیکی استفاده می شود و بخش مهمی از بخش میکروبیولوژی دارویی است.

  بیشتربدانید:آزمون سمیت ژنی-تست سمیت سلولی-تست زیست سازگاری

در این آزمون از لایزیت آمیبوسیت های خرچنگ نعل اسبی استفاده می شود.

دلیل اینکه آزمایش اندوتوکسین باکتریایی LAL یا آزمایش لیمولوس آمبوسیت نیز نامیده می شود، این است که لیزات سلول های خونی (آمبوسیت ها) از خرچنگ های نعل اسبی (نام لاتین Limulus Polyphemus) به دست می آید. لیزات سلول های خون خرچنگ نعل اسبی با اندوتوکسین های باکتریایی واکنش نشان می دهند.

 

لیمولوس آمبوسیت لیزات (LAL) یک نوع عصاره آبی سلول های خونی (آمبوسیت ها) از خرچنگ های نعل اسبی است. این معرف LAL ​​با اندوتوکسین باکتریایی و لیپوپلی ساکارید (LPS) که یکی از اجزای غشایی باکتری های گرم منفی است، واکنش نشان می دهد. این واکنش پایه معرف LAL ​​است که برای یافتن و تعیین کمیت اندوتوکسین های باکتریایی استفاده می شود.

 

لایزت LAL با حساسیت های مشخص به صورت کیت آماده به مصرف عرضه می شود که در صورت قرار گرفتن در معرض مقادیر مناسب اندوتوکسین باکتریایی لخته می شود. در این آزمون، وجود یا عدم وجود اندوتوکسین باکتریایی با تشکیل ژل یا عدم تشکیل ژل مشخص می شود.

روش تست ژل لخته LAL به هیچ تجهیزات یا نرم افزار تشخیصی نیاز ندارد، فقط چشم انسان برای تعیین اینکه آیا لخته شدن ژل پس از انکوباسیون دارو صورت گرفته است یا خیر، استفاده می شود. این روش تست LAL کاملاً کیفی ساده، مقرون به صرفه است اما حساسیت کمی دارد.

  تب زایی | تست تب زایی یا پیروژنیسیتی