تست تب زایی به روش LAL
تست اندوتوکسین ( تب زایی ) به روش LAL

تست اندوتوکسین یا تست تب زایی بر طبق USP 41 بخش ۸۵ برای محصولات دارویی و بخش ۱۶۱ برای تجهیزات پزشکی انجام می‌گیرد.

به طور كلي برای تست اندوتوکسین یا تب زایی باید بدانید که اندوتوكسين‌ ها بخش‌هايي از ديواره سلولي باكتريهاي گرم منفي هستند که از اوايل دهه ۱۹۰۰ميلادي به خاطر اثرات گرمازايي خود (تب القايي) شناخته شده‌اند و اهميت آنها به علت تاثير بر سيستم ايمني مي‌باشد.

اندوتوكسين‌ ها اغلب به خاطر ساختار خود كه شامل يك بخش ليپيدي (چربي، بخش تحريك كننده سيستم ايمني، داراي كمترين تنوع) و يك بخش پلي‌ساكاريدي (بخش متمايز كننده هر سويه، داراي تنوع بالا در طول زنجيره) مي‌باشند، ليپو پليساكاريد LPS ناميده ميشوند.

توکسین ها معمولاً در فاز لگاریتمی (Exponential growth) رشد باکتری ها ترشح می شوند و قاعدتاً هم از باکتری های زنده تولید می شوند اما همانطور که گفته شد در برخی موارد مانند باکتری دیفتری ، توکسین پس از لیز باکتری در محیط آزاد می‌شود.
 تست تب زایی عاملی مهم برای جلوگیری از مرگ افراد
 این عوامل تب‌ زا به دلیل ایجاد حساسیت در بدن افراد به شدت می‌توانند خطرناک باشند و حتی سبب مرگ فرد شوند. از این رو تشخیص آنها و انجام تست تب زایی قبل از استفاده از محصولات حوزه پزشکی ضروری است.
در تست اندوتوکسین یا تب زایی به روش LAL غلظت بحرانی برای اندوتوکسین‌ ها در سیستم‌های آزمون برون‌تنی، بر اساس سیستمی که به کار می‌روند متغییر است. مقدار ۰٫۰۱ng اندوتوکسین، IL-1 و TNF را در ماکروفازهای انسانی فعال می‌کند. در حالی که مقدار ۰٫۰۴۸ng اندوتوکسین، پاسخ‌های زیستی نامحسوسی را در سلول‌های دندریتیک انسان یا سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی القا می‌کند.

تست تشخیص تب‌زایی به صورت Invivo و اغلب به شیوه LAL Gel-clot انجام می‌گیرد. در تست اندوتوکسین (تب زایی) به روش LAL، اندوتوکسین‌ها فاکتوری را در عصاره خونی آبی رنگ خرچنگ نعل اسبی limulus amebocyte lysate (LAL)  فعال می‌کنند.

 
تست تب زایی به روش LAL

این امر در تست تب زایی موجب یک آبشار پروتئولیتیک می‌شود. آنزیم انعقادی که به وسیله یکی از فاکتورهای فعال شده و از یک آنزیم پیش انعقادی آزاد می‌شود، پروتئولیز کواگولوژن را در LAL کاتالیز می‌کند و قطعات به دست آمده که کواگولین‌ها هستند، از طریق باند دی‌ سولفیدی به طورخود به‌ خودی به یکدیگر متصل می‌شوند و درنتیجه باعث کدورت LAL می‌شوند. در نهایت نیز یک لخته ژلی تشکیل می‌شود. تشکیل لخته پس از واژگونی لولی‌های آزمایش به وسیله چشمی تعیین می‌شود.