آزمون بررسی رشد سلولی؛ تکنیک‌های کشت سلولی در توسعه محصولات بیوتکنولوژیکی ضروری است: زیرا آزمایش‌ها روی کشت‌های سلولی اغلب ساده‌ترین راه‌اندازی هستند و به دلیل وجود تعداد زیادی آزمایش مختلف: تکثیر، مهاجرت، زنده ماندن، التهاب، آپوپتوز.

 

برای کسب اطلاعات بیشتر و دریافت خدمات با ما تماس بگیرید.

سه نوع سلول اصلی در آزمایشات آزمایشگاهی استفاده می شود:

• خطوط جاودانه (سلولی که از پیری فرار کرده است)
• خطوط اولیه (مستقیماً از یک ارگانیسم مشتق شده، با کمترین تکرار ممکن)
• سلول های پرتوان القایی (سلول های بنیادی تمایز نیافته از کشت ها)

آزمایش‌های خارج از بدن، یعنی بر روی نمونه‌های بافتی که مستقیماً از بدن انجام می‌شوند، تصویری نزدیک‌تر به واقعیت بیولوژیکی ارائه می‌دهند.

 

تمام تست‌های توسعه‌یافته در یک برنامه تحقیق و توسعه حیاتی هستند زیرا می‌توانند به آزمون‌های مرجع تبدیل شوند که در طول مدت پروژه مورد استفاده قرار می‌گیرند. ایجاد یا بهینه سازی یک سنجش مبتنی بر سلول می تواند مشکل باشد، بنابراین ممکن است ارزش آن را داشته باشد که بخشی از توسعه آن را برون سپاری کنیم.

 

به همین دلیل است که نیکوفارمد یک سرویس اختصاصی برای کمک به آزمایشگاه‌ها، شرکت‌های بیوتکنولوژی، شرکت‌های فناوری دارویی و پزشکی برای کمک به برون‌سپاری برنامه‌های تحقیقاتی خود ایجاد کرده است.

 

سنجش حیات سلولی، تکثیر سلولی و سمیت سلولی

تست‌های زنده ماندن سلولی نشانگرهای سلولی مختلف مانند ATP یا فعالیت آنزیم متابولیک را به عنوان شاخص‌های سلامت سلولی اندازه‌گیری می‌کنند. بسیاری از سنجش‌های زنده‌مانی و تکثیر سلولی، از جمله انواع سنجش‌های سمیت سلولی، با استفاده از ریدرهای میکروپلیت خوانده می‌شوند. تست های زنده ماندن مختلفی با استفاده از حالت های تشخیص مختلف وجود دارد که هر کدام مزایای خاص خود را دارند.

 

زنده ماندن سلول چیست؟

زنده ماندن سلولی به تعداد سلول های سالم در یک جمعیت اشاره دارد و می توان آن را با استفاده از تست هایی که فعالیت آنزیم، یکپارچگی غشای سلولی، تولید ATP و سایر شاخص ها را اندازه گیری می کند، ارزیابی کرد. این روش ها می توانند از نتایج لومینسانس، فلورسانس یا رنگ سنجی به عنوان شاخص زنده ماندن سلولی یا حتی مسیرهای سلولی خاص استفاده کنند. سنجش سمیت سلولی و زنده ماندن سلولی اغلب برای ارزیابی اثر دارو یا درمان استفاده می‌شود، و آنها ابزار ارزشمندی در جستجوی عوامل درمانی جدید و همچنین برای ارتقای دانش ما در مورد چگونگی سلول‌های سالم هستند.

 

تکثیر سلولی چیست؟

تکثیر سلولی به افزایش کلی تعداد سلول ها اشاره دارد و برای رشد بافت ضروری است. این نتیجه هم رشد سلولی و هم تقسیم سلولی است. هر دوی این فرآیندها در موجودات سالم به شدت تنظیم می شوند تا اندازه سلول و جمعیت را متعادل کنند. در آزمایش‌ها، نظارت بر تکثیر سلولی می‌تواند بینشی در مورد اثرات داروها یا سایر درمان‌ها بر روی جمعیتی از سلول‌ها ارائه دهد.

 

• منابع موجود در مورد سلامت سلولی
• با روش تکثیر سلولی دلفیا به سمیت سلولی دسترسی پیدا کنید
• سنجش بقای سلولی مبتنی بر ATP
• بقای سلولی، تکثیر سلولی، سنجش سمیت سلولی با رنگ سنجی (MTT، XTT، MTS)
• کیت های سنجش زنده ماندن سلول های EarlyTox
• متابولیسم اکسیداتیو و فعالیت گلیکولیتیک را اندازه گیری کنید
• تکثیر سلولی را با استفاده از کیت CyQUANT تعیین کنید
• گونه های فعال اکسیژن (ROS)

 

سنجش MTT بر اساس فعالیت میتوکندری

نشان داده شده است که تکثیر سلولی عملکردهای متعددی در رشد و تشکیل سلول دارد، از جمله نقش در رشد، مورفوژنز و بیان ژن.

روش‌های رایج مورد استفاده برای این منظور، شمارش هموسیتومتر، تعیین محتوای پروتئین، اندازه‌گیری وزن مرطوب یا خشک و تعیین چگالی نوری (OD) است. اگرچه شمارش هموسیتومتر و تعیین پروتئین از مضرات زمان‌بر و خسته‌کننده بودن برخوردار است، اندازه‌گیری وزن مرطوب یا حتی خشک برای حجم‌های کشت بسیار کوچک غیرعملی است.

یک روش جایگزین بر اساس تبدیل و کمی سازی رنگ سنجی MTT است. زنجیره تنفسی و دیگر سیستم‌های انتقال الکترون MTT و سایر نمک‌های تترازولیوم را کاهش می‌دهند و در نتیجه کریستال‌های فرمازان بنفش نامحلول در آب را در داخل سلول تشکیل می‌دهند. مقدار این کریستال ها را می توان به روش اسپکتروفتومتری تعیین کرد و به عنوان تخمینی از تعداد میتوکندری ها و در نتیجه تعداد سلول های زنده در نمونه عمل می کند. این ویژگی‌ها را می‌توان در سنجش‌های سمیت سلولی یا تکثیر سلولی، که به طور گسترده در ایمونولوژی، سم‌شناسی و زیست‌شناسی سلولی استفاده می‌شود، مورد استفاده قرار داد.

 

مقالات بیشتر:

تست  چسبندگی سلولی

تست تشخیص مایکوپلاسما به روش PCR

تست  سمیت سلولی به روش MTT

تست  خون سازگاری و هولیز کنندگی

اصل تست MTT

اصل تست MTT بر اساس فعالیت میتوکندری است. برای سلول های زنده، فعالیت میتوکندری ثابت است و بنابراین افزایش یا کاهش تعداد سلول های زنده به طور خطی با فعالیت میتوکندری مرتبط است. فعالیت میتوکندریایی سلول‌ها با تبدیل نمک تترازولیوم MTT به کریستال‌های فورمازان که می‌توانند برای اندازه‌گیری ثابت حل شوند، مرتبط است. بنابراین، هر گونه افزایش یا کاهش در تعداد سلول های زنده را می توان با اندازه گیری غلظت فورمازان به صورت اسپکتروفتومتری با استفاده از صفحه خوان در طول موج 570 نانومتر در مقابل 690 نانومتر تشخیص داد.

اجزای کیت: محلول MTT + حلال MTT

 

تست زنده ماندن MTT

اول) اهداف

تست زنده ماندن MTT یک روش رنگ سنجی است که امکان شمارش سریع سلول های زنده را فراهم می کند. سپس می‌توان گزارشی با تعداد سلول‌های مرده تهیه کرد، که به‌ویژه در آزمایش‌های سمیت یک محصول مفید به نظر می‌رسد، یا زمانی که بحث نظارت بر تکامل جمعیت سلولی مطرح است.

 

دوم) اصل

این روش مبتنی بر استفاده از نمک تترازولیوم MTT است

این نمک حاوی حلقه ای از تترازولیوم است که در حضور سوکسینات دهیدروژناز میتوکندری، آنزیمی از زنجیره تنفسی میتوکندری به فرمازان کاهش می یابد. (تومیناگا و همکاران، 2019) سپس یک رسوب بنفش رنگ را تشکیل می دهد. محتوای رسوب تشکیل شده با مقدار میتوکندری و در نتیجه سلول های زنده موجود (اما همچنین با فعالیت متابولیکی هر سلول) متناسب است. سپس می توان با اسپکتروفتومتری مقدار نسبی سلول های زنده و با متابولیسم فعال اندازه گیری کرد.